通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細胞系中獲得具有特殊性質或標志物的培養(yǎng)物稱為細胞株。
動物細胞株是用單細胞分離培養(yǎng)或通過篩選的方法,由單細胞增殖形成的細胞群。細胞株的特殊性質或標志必須在整個培養(yǎng)期間始終存在。
原代培養(yǎng)的細胞一般傳至10代左右就不容易傳下去了,細胞的生長就會出現(xiàn)停滯,大部分細胞衰老死亡。但是有少數(shù)的細胞能夠度過“危機”而繼續(xù)傳下去,這些存活的細胞一般能夠傳到40~50代,這種傳代細胞叫做細胞株。
瞬時轉染和穩(wěn)定轉染的區(qū)別:
瞬時轉染:外源片段的表達時間短暫。這主要是因為外源導入的裸露的載體整合入基因組的幾率非常低,所以以染色體外形式存在,不能隨細胞分裂而一同復制導致拷貝數(shù)被稀釋導致的。
而且考慮到細胞分裂會稀釋質粒的量,所以起初轉染的質粒拷貝數(shù)高。這就導致瞬時轉染呈現(xiàn)一個高拷貝到低拷貝迅速降低的過程,且無法在這個系統(tǒng)上實現(xiàn)可誘導表達。
穩(wěn)定轉染:是相對瞬時轉染而言,進入細胞的質粒整合入細胞基因組中,并能隨細胞分裂穩(wěn)定傳遞下去。在這個系統(tǒng)中,質粒表達穩(wěn)定,拷貝數(shù)低,且能實現(xiàn)誘導表達。穩(wěn)定轉染并不是一種與瞬時轉染不同的方法,只是對瞬時轉染的細胞進行篩選,得到穩(wěn)定整合的動物細胞株。
穩(wěn)定整合的幾率因基因傳遞的方法而異,跨度可以從10^-8到10^-1。因此,對于有的轉染方法,比如化學試劑介導的轉染,其整合幾乎可以忽略不計。質粒載體整合的位點并不是*隨機分布,依據不同的基因傳遞方法,呈現(xiàn)不同的靶向傾向性,所以是一種半隨機整合。