在優化免疫學反應前提后,建立了克百威間接競爭ELISA法和直接競爭ELISA法,檢測限分別為0.005mg/L和0.01mg/L,檢測線性范圍分別為0.005~10mg/L和0.01~10mg/L,并在此基礎上研制了兩種用于檢測水、泥土、蔬菜、中毒樣品的酶聯免疫試劑盒,人ELISA試劑盒其ELISA試劑盒的重現性好,批內批間及整體變異系數均低于8.0%,試劑盒檢測的正確度高,除嘔吐物樣品外,其余樣品的回收率均在89.62%以上。
本研究以2,3-二氫-2,2-二甲基-7-苯并呋喃氯甲酸酯為基礎合成了克百威的兩種半抗原,6—[[(2,3-二氫-2,2-二甲基-7-苯并呋喃基氧)羰基]氨基]已酸(BFNH)和4—[[(2,3-二氫-2,2-二甲基-7-苯并呋喃基氧)羰基]氨基]丁酸(BFNB)。 用合成的克百威免疫原免疫兔子后獲得價、高特異性的抗克百威多克隆抗血清,用間接ELISA測定效價為1:16000~1:128000,純化抗體效價為1:500000~1:4000000。并選擇由BFNB-BSA免疫兔子所得的一種純化抗體與辣根過氧化物酶偶聯制備成酶標抗體,人ELISA試劑盒同時了測定了酶標抗體的活性,效價為1:4000。所得克百威多抗血清與丁硫克百威的交叉反應率6.19%,與呋喃酚的交叉反應率為4.00%,與供試的其它5種氨基甲酸酯類的交叉反應率均小于0.44%,對于三種有機磷的交叉反應率均低于0.12%。 同時,根據抗體抗原的特異性結合反應的原理,進一步研究了抗克百威抗體對小鼠克百威中毒后的解毒作用,試驗結果表明,抗體可以較好地緩解克百威對乙酰膽堿酯酶按捺作用的癥狀,人ELISA試劑盒使中毒小鼠逐漸恢復正常。同時將這兩種半抗原與載體蛋白牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶聯合成克百威免疫原和包被抗原,并用紫外光譜法測定克百威與載體蛋白結合物結合比。