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現貨人骨成型蛋白ELISA檢測試劑盒
更新時間:2013-12-12   點擊次數:1318次

本試劑僅供研究使用  標本:血清或血漿

 

ELISA檢測試劑盒試驗原理:

BMP試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗(ELISA).已知BMP濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將BMP和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌,去除未結合的酶結合物,然后加入底物A、B,和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中BMP的濃度呈比例關系。

自備材料

1. 蒸餾水。

2. 加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。

3. 振蕩器及磁力攪拌器等。

 

安全性

1. 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。

2. 實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。

3. 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

 

ELISA檢測試劑盒操作注意事項

1. 試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。

2. 實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。

3. 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。

4. 使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。

5. 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

6. 洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。

7. 底物A應揮發,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。

8. 加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。

9. 按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

 

樣品收集、處理及保存方法

1、 血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2、 血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

3、 細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4、 保存------如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

 

試劑的準備

標準品:標準品的系列稀釋應在實驗時準備,不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。

1. 洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋。

 

操作步驟

1. 使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產生加樣上的誤差。

2. 根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。

3. 加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。

4. 甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。

5. 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。

6. 甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。

7. 每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。

8. 取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果。

9. 在450nm波長處測定各孔的OD值。

 

局限

6號標準品以上的結果為非線性的,根據此標準曲線無法得到的結果。

 

試劑盒性能

1. 靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990。

2. 特異性:不與人其它細胞因子反應。

3. 重復性:板內、板間變異系數均小于10%。

 

ELISA檢測試劑盒結 果 判 斷 與 分 析

1、儀器值:于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

 

2、以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應的BMP標準品濃度為橫坐標(X),做得相應的曲線,樣品的BMP含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。

 

3、檢測值范圍:0-80ng/ml

 

4、敏感度: 0.1 ng/ml

間硝基苯甲醛 3-Nitrobenzaldehyde X83618 BR,50%,分子量60-100萬,液體 1克
對硝基苯甲醛 4-Nitrobenzaldehyde X83619 BR,50%,分子量70000,液體 25克
2-苯基乙醛 Phenylacetaldehyde X83620 BR,50%,分子量6-75萬,液體 100克
鄰苯二醛 OPA X83621 BR,50%,分子量1800-2000,液體 25克
對酞醛 p-Phthalaldehyde X83622 BR,50%,分子量1200-1300,液體 100克
甲基乙二醛 Methylglyoxal X83623 超純,99% 500克
正十一醛 Undecanal X83624 AR,99.5% 100克
焦兒茶醛二甲醚 3,4-二甲氧基苯甲醛3,4-Dimethoxybenzaldehyde X83625 AR,99.5% 500克
香草醛 Vanillin X83626 AR,99% 25克
二水合鉬酸鈉 Sodium molybdate dihydrate X83627 AR,99.5% 100克
酚酞二磷酸四鈉鹽 Phenolphthalein bisphosphate tetrasodium salt X83628 AR,99% 100毫克
無水磷酸肌酸鈉鹽 Creatine phosphate sodium salt X83629 AR,98.5% 500毫克
四水磷酸肌酸鈉鹽 Sodium creatine phosphate dibasic tetrahydrate X83630 CP,99% 100克
去氧膽酸鈉 Deoxycholic acid sodium salt X83631 AR,98.5% 1公斤
豬膽酸鈉 Cholic aicd sodium Salt X83632 CP,98% 100克
牛膽酸鈉 Sodium taurocholate hydrate X83633 CP 1公斤
2,6-二氯吲哚酚 DCIP X83634 CP,98.5% 100克
正丁酸鈉 Sodium butyrate X83635 CP,98% 1公斤
肌醇六磷酸鈉 Phytic acid sodium salt hydrate X83636 特純,98% 100克
水合植酸十二鈉 Phytic acid dodecasodium salt hydrate X83637 CP,98% 1公斤
焦葡萄酸鈉 Sodium pyruvate X83638 特純,99% 50克
碳酸鈉 Sodium carbonate anhydrous X83639 AR,99% 50毫克
重碳酸鈉 Sodium hydrogen carboante X83640 光譜級,99.8% 100毫克
磷酸一鈉單水合物 Sodium dihydrogen phosphate monohydrate X83641 CP,98% 5克
磷酸一鈉二水物 Sodium phosphate monobasic dihydrate X83642 CP,99% 25克
磷酸一鈉 MSP X83643 AR,98% 5克
磷酸二鈉 Sodium phosphate dibasic dodecahydrate X83644 AR,99% 25克
七水合磷酸二鈉 SSodium phosphate dibasic heptahydrate X83645 CP 100克
無水磷酸二鈉 Sodium phosphate dibasic X83646 特純,97% 500克
正磷酸鈉 TSP X83647 特純,98% 100克
三堿式磷酸鈉 Trisodium phosphate X83648 BR,98% 25克
4,4-二羧基-2,2-聯喹啉二鈉 BCA X83649 CP,99% 25克
酒石酸鈉 D-(+)-Tartaric acid disodium salt X83650 BR,98% 20毫克
L-酒石酸鈉 L-(+)-Tartaric acid disodium salt X83651 BR,98% 100毫克
二水偏釩酸鈉 Sodium metavanadate dihydrate X83652 CP,99% 1克
釩酸鈉 Sodium metavanadate X83653 CP,98% 100毫克
四苯基硼酸鈉 NaTBP X83654 CP,95% 1毫升
氟化鈉 Sodium fluoride X83655 CP,98.5% 25克
苛性鈉 Sodium hydroxide X83656 AR,99.8% 100克
乙二酸鈉 Sodium oxalate X83657 工藝級,90% 500克
一硫化鈉 Sodium sulfide X83658 CP,98% 5克
偏鋁酸鈉 Sodium aluminate X83659 工藝級 250毫克
偏銻酸鈉 Sodium antimonate X83660 CP,98.5% 100毫升
二水鉍酸鈉 Sodium bismuthate X83661 BR,99% 1克

 

上海通蔚生物科技有限公司

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