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下面談一下怎樣靈活應(yīng)用ELISA這個(gè)檢測(cè)方法以及怎樣去挑選ELISA試劑盒。ELISA這個(gè)方法的原理，大家都很明白，網(wǎng)上的資料很多。可真正用起來的時(shí)候，偶然間就會(huì)有點(diǎn)犯糊涂，我談一下自己的理解。
1、有些客戶會(huì)用OVA（卵清卵白）做一些哮喘，過敏性腸炎的模型，然后會(huì)檢測(cè)粘膜特異性的sIgA以及血清內(nèi)里IgG，IgE等指標(biāo)。當(dāng)客戶向我咨詢購置這幾個(gè)指標(biāo)的試劑盒的時(shí)候，我很肯定地說這些指標(biāo)的檢測(cè)要你自己特制，不會(huì)有商品化的試劑盒出售的。當(dāng)你baidu一下時(shí)，頁面出來大量的商品化的試劑盒，千篇一律的明書時(shí)候，我真的是蒙了，我懷疑自己跟不上時(shí)代了。我不去評(píng)論這些試劑盒的真假，我仍舊建議做這些檢測(cè)指標(biāo)的朋友，選擇sigma公司V級(jí)別的OVA，然后用這個(gè)來造模，自己包板摸條件，用OD值來比較抗體含量的變化。
2、NO的檢測(cè)，一般都是采用經(jīng)典的Greiss法，如今市場(chǎng)上竟然有NO ELISA試劑盒，真是徹夜未眠也搞不明白。另外還有做氧化應(yīng)激指標(biāo)MDA的檢測(cè)，我還是推薦各位用碧云天或者進(jìn)口的檢測(cè)試劑盒，而不是ELISA試劑盒。
3、ELISA檢測(cè)方法簡單，靈敏度高，我個(gè)人認(rèn)為ELISA檢測(cè)血清或者培養(yǎng)上清的細(xì)胞因子、胰島素、激素等排泄型的小分子卵白的定量檢測(cè)；病原體抗原的定性與定量；評(píng)估自己制備的血清抗體的效價(jià)等。很多客戶有個(gè)誤區(qū)，拿來一個(gè)指標(biāo)就想當(dāng)然地嘗試用ELISA去檢測(cè)，我還是建議多動(dòng)腦，該檢測(cè)活性的檢測(cè)活性，該做western的做western。
4、對(duì)付胰島素的檢測(cè)，我還是推薦millpore 旗下LInco公司的檢測(cè)試劑盒，不管是放免還是ELISA，據(jù)說權(quán)在他們手中。 zui近看了資料，瑞典Mercodia公司的胰島素檢測(cè)試劑盒也是得到市場(chǎng)的承認(rèn)的。對(duì)付ox-ldl的檢測(cè)，Mercodia公司也是很牛的。
5、對(duì)付一些小分子的檢測(cè)，例如：前線腺素、糖皮質(zhì)激素的檢測(cè)，我的理解是要用競爭法ELISA去檢測(cè)，也要購買采用這個(gè)方法的盒試劑盒。ELISA試劑盒一般細(xì)胞因子的檢測(cè)，都是采用常規(guī)的夾心法ELISA檢測(cè)，由于因子分子量比力大，一般10幾個(gè)KD左右，很容易找到兩個(gè)或多個(gè)抗原表位。
而小分子很難找到兩個(gè)不通的表位，也就決定了包被抗體和檢測(cè)抗體無法同時(shí)結(jié)合小分子并固相化。解決方案便是酶標(biāo)板上包被二抗，每個(gè)孔加入一定量的酶標(biāo)的小分子，然后加樣品，再加不帶標(biāo)志的檢測(cè)抗體，顯色底物。樣品的目標(biāo)小分子的含量越高，吸光度越低。