預(yù)期應(yīng)用
ELISA法定量測(cè)定大鼠血清、血漿或其它相關(guān)生物液體中血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)含量。
實(shí)驗(yàn)原理
用純化的ACE抗體包被微孔板,制成固相載體,往微孔中依次加進(jìn)標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化的ACE抗體、HRP標(biāo)記的親和素,經(jīng)過*洗滌后用底物(TMB)顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成*的。顏色的深淺和樣品中的ACE呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(
試劑盒組成及試劑配制
1、 酶標(biāo)板:一塊(96孔)
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B:1×10ml。
6、 檢測(cè)溶液A:1×120
7、 檢測(cè)溶液B:1×120
8、 底物溶液:1×10ml/瓶。
9、 濃洗滌液:1×30ml/瓶,使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液:1×10ml/瓶(2 mol/L H2SO4)。
11、覆膜:5張
12、使用說明書:1份
操縱步驟
實(shí)驗(yàn)開始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫,試劑不能直接在37
1、 加樣:分別設(shè)空缺孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。空缺孔加樣品稀釋液 100
性,每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2、 棄往液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100
3、 棄往孔內(nèi)液體,甩干,洗板 3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400
4、 每孔加檢測(cè)溶液B工作液(臨用前配制)100
5、 棄往孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,方法同步驟3。
6、 每孔加底物溶液90
7、 每孔加終止溶液50
8、 立即用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)丈量各孔的光密度(
1、 由于現(xiàn)有條件及科學(xué)技術(shù)水平尚不能對(duì)所有供貨商提供的所有原料進(jìn)行全面的鑒定與分析,
本產(chǎn)品可能存在一定的質(zhì)量技術(shù)風(fēng)險(xiǎn)。
2、 *的實(shí)驗(yàn)結(jié)果與試劑的有效性、實(shí)驗(yàn)者的相關(guān)操縱以及當(dāng)時(shí)的實(shí)驗(yàn)環(huán)境密切相關(guān),請(qǐng)務(wù)必
預(yù)備充足的標(biāo)本備份。
3、 在儲(chǔ)存及溫育過程中避免將試劑暴露在強(qiáng)光中。所有試劑瓶蓋須蓋緊以防止蒸發(fā)和微生物的 污染,由于蛋白水解酶的干擾將導(dǎo)致出現(xiàn)錯(cuò)誤的結(jié)果。
4、 試劑盒保存:請(qǐng)收到試劑盒后盡快將標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液A和檢測(cè)溶液B保存于-20
5、 濃洗滌液會(huì)有鹽析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶。
6、 剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會(huì)有少許水樣物質(zhì),此為正常現(xiàn)象,不會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成任何影響。
7、 有效期:6個(gè)月。
8、 本操縱說明適用于48T試劑盒,但48T試劑盒所有試劑減半。
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